ELISA 技术

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ELISA 简介

酶联免疫吸附测定简称 ELISA。它是最重要的免疫测定方法之一。它可以使用包括抗体、抗原、蛋白质、糖蛋白和激素在内的实验室技术来识别血液中某些物质的存在。

在这个过程中，抗体和抗原结合以获得显著的结果。抗体是由个体免疫系统产生的一种蛋白质。这种蛋白质可以与靶抗原的特定区域结合。在某些传染病的情况下，我们可以检测到体内抗体的存在。但这只有在抗原-抗体结合成功的情况下才能成功。

ELISA 所需材料

ELISA 测试通常在 96 孔板中进行。主要目的是使用 96 孔板，因为可以在一个实验中测试多个样本。吸附板的主要特征是抗原和抗体只能粘附在表面上。每种 ELISA 技术都测量特定的抗原。步骤如下：

• 有两组抗体检测选定的产物，如细胞因子。ELISA 板应涂有捕获抗体。如果存在过量的抗体，则应将未结合的抗体从板上洗掉。

• 将样品置于板上。板中已经涂覆的捕获抗体附着在样品中的任何抗原上。样品具有不同的浓度。过量的样品将从板上洗掉。

• 下一步是添加检测抗体。辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶酶与检测抗体混合。这种类型的抗体与任何靶抗原结合在一起。随后应将底物添加到板上。在 ELISA 测定过程中，它们将物质转化为有色产物。

• 使用光密度可以测量抗原浓度。

抗体-抗原结合

在单独的抗原位点，抗体和抗原之间的相互作用强度发生。不同的抗体臂在每个抗原位点内的多个位点连接抗原。通常，抗体通过与抗原的弱共价力相互作用。如果它们之间的相互作用很强，则可以看到更强的亲和力。抗原和抗体的稳定性和强度受三个主要因素控制。虽然其相互作用受许多因素的影响，包括 pH 值、温度和离子强度。

原理

ELISA 技术的基本原理如下

• ELISA 过程在多孔板的固体表面上进行。

• 固体表面存在于抗原的固定化。

• 这可以通过捕获抗体直接或间接地完成，捕获抗体可以防止其自身在表面上的移动。

• 抗原从样品中存在的其他成分中分离出来。这由分析师协助完成

• 在 ELISA 技术中，可以轻松测试多个样本。

ELISA 的类型

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直接 ELISA

• 它有助于发现样品中抗体的存在。

• 板涂有抗原

• 在样品板中，应添加抗原，这是第一个结合步骤。

• 板应在夜间孵育。

• 孵育完成后，应洗掉多余的抗体。

• 将缓冲液添加到板中，并重新洗涤板。

• 为了偶联酶，在那里放置了一种特定的初级检测抗体。

• 添加选定的酶偶联初级检测抗体。

• 借助分光光度法计算有色产物的吸光度。

间接 ELISA

• 它有助于发现样品中抗体的存在。

• 在这种方法中，抗体与样品板的孔结合。

• 然后将来自样品的抗体与涂有抗原的孔混合，以便它们可以彼此结合。

• 游离的初级抗体将被洗掉。

• 通过添加与酶偶联的次级抗体，抗原-抗体复合物的检测成功。

• 下一步是擦掉游离的次级抗体。

• 为了获得有色产物，添加特定的物质。

• 借助分光光度法计算有色产物的吸光度。

夹心 ELISA

• 通过这种方法检测样品中抗原的出现。

• 带有多个孔的平板覆盖有抗体。

• 在样品中添加良好的抗原。游离的抗原被洗掉。

• 酶与次级抗体结合，次级抗体也与另一种抗原结合。

• 游离的次级抗体被洗掉。

• 为了获得有色产物，将酶特异性物质添加到板上。

• 借助分光光度法，测量有色产物吸光度。

竞争性 ELISA

• 通过这种方法检测样品中抗原的浓度。

• 在这种方法中，带有多个孔的平板覆盖有抗原。

• 然后孵育抗体。这是通过将抗原置于富含抗原的溶液中来完成的。

• 然后将抗原在含有抗原的溶液中孵育

• 然后在微量滴定孔中应放置抗体-抗原溶液。

• 洗掉过量的抗体。

• 添加与酶结合的次级抗体，该抗体可以识别孔中可用的初级抗体数量。

• 借助分光光度法设置相同的吸光度

使用 ELISA 诊断的疾病

• 艾滋病毒。

• 莱姆病。

• COVID-19。

• 恶性贫血。

• 落基山斑疹热。

• 鳞状细胞癌。

• 梅毒。

• 妊娠试验

ELISA 的优点

• ELISA 技术非常有效。

• 由于在这种方法中使用了抗体，因此检测是在特定的机制中完成的

• 它具有较高的产量。市售的 ELISA 试剂盒以 96 孔板的形式出现，该测定法对 384 孔板有效。

• 操作简单。此过程中涉及的步骤所需时间较短，并且非常容易理解。

• 此过程确定样品中的抗原浓度。

• 它可以测试血清、血浆、细胞、组织提取物、尿液、唾液等的不同样品。

ELISA 的应用

• 在食品行业，该方法用于识别食品中过敏原的存在。

• 在病毒检测中，可以测量血清抗体的浓度。

• 它可以确定样品中抗体和抗原的存在。

• 它可以评估疾病暴发期间疾病的传播。

结论

ELISA 是最特异性和最重要的免疫测定方法之一。它可以使用包括抗体、抗原、蛋白质、糖蛋白和激素在内的实验室技术来识别血液中某些物质的存在。

常见问题解答

Q1. 什么是免疫测定法？

答：免疫测定法是一种生物化学检测方法，用于检测疾病，并基于抗原-抗体反应的原理。

Q2. 什么是莱姆病？

答：细菌是导致莱姆病的原因。它通过受感染的黑色腿蜱的叮咬传播。

Q3. HIV 的全称是什么？

答：HIV 的全称为人类免疫缺陷病毒。

Q4. 2019 年爆发的病毒性疾病是什么？

答：Covid 19 是一种于 2019 年爆发的病毒性疾病。